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脂质体(1-2)
作者:蛋白质药…    文章来源:www.yaodongxue.cn    点击数:    更新时间:2011-3-19          【字体:

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第一节 概述
 
 
  早在60年代初,英圆Bangharn等发现,磷脂分散在水中时能形成多层微囊,且每一层均为脂质双分子层,各层之间被水相隔开,这种具有类似生物膜双分子层结构的微囊称为脂质体(liposomes),见图20—1。这种结构是一种分子排列有序的近晶型液晶。近年来由于脂质体在基础理论及应用上的重要意义,对脂质体的研究引起了人们极大的兴趣。

    
  一、脂质体的基本性质
 
  脂质体的主要成分是磷脂,如磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺等。不同的磷脂均能独自或以一定的摩尔比形成脂质体。磷脂分子中含磷酸基团的部分具有强烈极性,称为亲水的极性头部或头基(head group),而磷脂分子中的两个长碳氢链具非极性,称为疏水的非极性尾部或尾基(tail group)。由于这种典型的双亲分子特性,使脂质体具有亲油亲水性,因此,脂质体作为药物或其它物质的载体,其包裹范围是很广的,亲脂性物质、两性物质以及水溶性成分都可以被包裹。从某种角度上说,只有二类物质难以被囊化,一类是在水相和有机相均不溶解的物质,另一类是在水相、油相中的溶解度都很大的物质,由于它们极易渗漏,故亦难以被囊化。又因磷脂是生物膜的组成成分,生物体内存在有分解酶,很容易代谢,因而脂质体又具有生物降解性和生物相容性。大量研究工作表明,脂质体进入体内主要被网状内皮系统(reticular endothelial system,RES)释噬而激活机体的自身免疫功能并改变被包封药物的动力学性质和体内分布,使药物主要在肝、脾、肺和****等组织器官中累积,从而提高药物的治疗指数,减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。因此,脂质体在许多疾病尤其癌症的治疗中显示了明显的优越性。
 
  二、脂质体膜的化学组成及性质
 
  脂质体与由表面活性剂构成的胶团(micelles)不同,后者是由单分子层组成。胶团增溶的溶液用肉眼观察,呈透明状,而脂质体是以类脂质(如磷脂、胆固醇等)构成的双分子层为膜材包合而成。
 
  (一)卵磷脂和卵磷脂膜的性质
 
  1.卵磷脂(1ecithin)
 
  磷脂是构成脂质体的主要化学成分,其基本化学结构如图20—2。

                               
  其中最具代表性的是磷脂酰胆碱(phosphatidyl choline,PC),亦称卵磷脂。卵磷脂的来源有天然的,也有合成的。天然卵磷脂主要来自蛋黄和大豆,它们是形成许多细胞膜的主要磷脂成分,也是制备脂质体的主要原料,与其它磷脂相比,它的价格相对较低,化学性质也较稳定。天然卵磷脂属中性磷脂,实际上是一大类磷脂酰胆碱化合物的混合物,其中含有不同长度和不同饱和度的脂肪酸链,包括一些饱和脂肪酸,如月桂基(C12)、肉豆蔻酰基(C14)、棕榈酰基(C16)及硬脂酰基(C18)和一些不饱和脂肪酸,如棕榈油酰基(C16)、油酰基(C18)、亚油酰基(C18)及亚麻油酰基(C18)。
 
  2.卵磷脂膜的相转变(phase transititons)
 
  在不同温度下,卵磷脂膜以不同的相形式存在。随着温度的升高,磷脂膜从紧密排列的胶态转变成液晶态,在转变过程中,每个分子运动的自由度大大提高,引起膜的流动性增加。磷脂膜从胶态转变为液晶态时的温度即为其相变温度(phase transition temperature,Tc)。磷脂质碳氢链的长度及不饱和度将影响相变温度的高低,一般而言,碳氢链越长和饱和度越高,相变温度也越高。通常哺乳动物来源的磷脂膜的相变温度从O~40℃不等,而蛋黄卵磷脂膜的相变温度在-15~-7℃范围内。
  磷脂膜的相转变和流动性对脂质体的制备有重要意义,也决定了脂质体的一系列性质如渗透性、融合、凝聚及与蛋白质的结合程度等,并进而显著影响脂质体的稳定性及其在生物体内的行为。
 
  3.膜渗透性(meml3rane permeability)
 
  脂质体膜具有半透膜的性质,不同分子和离子透过膜的扩散速率不同。在有机溶剂和水性介质中均具高溶解度的分子易于透过磷脂膜;一些极性分子如葡萄糖或分子量较大的分子通过膜的速率则很小。具中性电荷的小分子如水可以很快通过膜扩散;而带电离子则差异很大,质子和氢氧根离子可很快通过膜,钠离子和钾离子都十分缓慢。随着磷脂脂肪酸链不饱和度的增加,钠离子的通透性反而下降,而葡萄糖分子稍有增加。若增加链长度则分子层膜厚度增加,所有物质的通透性都将有所下降。在相变温度时,质子的通透性增加,并随温度升高而进一步提高。相反,钠离子和大部分物质在相变温度时通透性最大。见图20-3。

     
  因为磷脂膜是一半透膜,膜两侧物质浓度的不同会产生渗透压,导致水分子在一侧的聚集。当脂质体内包裹较高浓度物质,而该物质在外相的浓度较低时,由于水分子的渗入引起脂质体膨胀,扩大了相邻磷脂分子间的空间,磷脂膜的面积也随之增大,在这种情况下,就会促进那些包裹在脂质体内的分子量较小物质的渗漏。有时,渗透压可能导致磷脂膜的破裂。
 
  (二)其它中性磷脂
 
  除了磷脂酰胆碱外,脂质双分子膜也可由其它一些中性磷脂(neutral phosphalipids)如神经鞘磷脂(sphingomyelin,SM)或烷基醚卵磷脂组成,醚键取代酯键的磷脂更不容易水解,而对膜的物理性质无明显影响。天然哺乳动物的神经鞘磷脂的相变温度在37℃左右。一般而言,神经鞘磷脂组成的双分子膜排列较紧密,物质不易渗透,膜的流动性也较低,因此比卵磷脂膜更稳定。
  存在于天然膜中的另一类中性磷脂是磷脂酰乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine,PE),与卵磷脂相比,它的头基较小,而且它的相邻膜分子之间可形成氢键。饱和磷脂酰乙醇胺类的相变温度约为20℃,比卵磷脂类要高,而不饱和磷脂酰乙醇胺类的相变温度几乎与卵磷脂类一样。
 
  (三)负电荷磷脂
 
  负电荷磷脂(negatively-charged phosphalipids)又称酸性磷脂,如二棕榈酰甘油磷脂(dipalmitoyl phosphatidyl plycerol,DPPG),它的甘油头基很大,主相变温度约在10℃,比二棕榈酰磷脂酰胆碱(dipalmitoyl phosphatidyl choline,DPPC)低。相反,二棕榈酰磷脂酸(dipalmitoyl phosphatidic acid,DPPA)的头基很小,单纯由DPPA组成的双分子膜具有较高的相变温度。中国药科大学同位素实验室研究方向:蛋白质药动学 多肽药动学 蛋白质多抗制备等 www.yaodongxue.cn
  由酸性磷脂组成的膜能与阳离子特别是二价阳离子如Ca2+和Mg2+强烈结合,使头基静电荷消失导致双分子层的凝聚,增加胶相时的密度,使相变温度提高。因此在合适温度下,Ca2+的加入可诱导从液晶相到胶相的转变。
  另一个常用的酸性磷脂是磷脂酰丝氨酸(phosphatidyl serine,PS),当有Ca2+和Mg2+同时存在时,磷脂酰丝氨酸对Ca2+更敏感。有时为了达到两种离子的同等结合,Mg2+浓度需达Ca2+浓度的20倍。由于静电荷的中和,Ca2+和Mg2+能引起由PS组成的脂质体的聚集。
 
  (四)胆固醇
 
  胆固醇(cholesterol)是许多天然生物膜的重要成分,其本身并不形成双分子层结构,但它能以很高的比例参与到磷脂膜中,它与磷脂的摩尔比可达1:1甚至2:1。加入胆固醇可改变磷脂膜的相变温度,从而影响膜的通透性和流动性。在高于相变温度时,胆固醇导致膜的通透性和流动性下降,在低于相变温度时,胆固醇的加入则引起膜的通透性和流动性增加。因此有人认为胆固醇具有稳定磷脂双分子层膜的作用。图20—4为胆固醇结构图。

      
  三、脂质体的物理结构
 
  (一)脂质体的分类
 
  除了能决定膜的性质如流动性、电荷密度和渗透性的各种化学成分外,脂质体的大小和形状等特性能决定脂质体的体内行为。脂质体的大小约可从直径25~1000nm,甚至更大。它们可由单层双分子膜组成,也可由多层双分子膜组成。不同大小的脂质体常需采用不同的制备方法,而不同的用途常要求特定大小的脂质体。目前,常按大小和结构将脂质体分类。
 
  (1)多层脂质体(multilamellar vesicles,MLV) 这些脂质体大小范围较宽,一般从100~1000nm不等,组成MLV的磷脂双分子层有五层或更多,层数较少的有时也称少层脂质体(oligolamellar liposomes)。
 
  (2)小单层脂质体(small unilamellar vesicles,SUV) 这是具有脂质双分子层的最小单位,其大小根据介质的离子强度和膜的脂质组成不同而不同,一般在生理盐水中,单纯由蛋卵磷脂组成的脂质体直径约15nm,由DPPC组成的约25nm。
 
  (3)大单层脂质体(1arge unilamellar vesicles,LUV) 这是指直径大于1000nm的由单层磷脂双分子层膜组成的脂质体。
 
  (4)中等大小单层脂质体(intermediate-sized unilamellar vesicles,IUV) IUV指的是直径在100~1000nm之间的单层脂质体。
 
  另外,有的文献也按制备方法来分类,如REV(reverse-evaporation vesicles)指用逆相蒸发法制备的脂质体;DRV(dried-reconstituted vesicles)指干燥重建法制得的脂质体及MVL(multivesicular liposomes)即多室脂质体。
 
  (二)脂质体设计的基本考虑
 
  1.类脂的选择
 
  选择何种类型的脂质体要根据需要而定。如果要制备一种脂质体,在体内外都能与生物系统产生合适的相互作用,并使其中的包裹物质保持尽可能长的时间.那么可以从上述提到的脂质成分开始。例如选择蛋卵磷脂、胆固酵和负电荷磷脂,摩尔比为0.9:1:0.1。当体系决定以后,可以选择一系列不同饱和度的磷脂进行试验以达到性质的最优化。各种饱和度的磷脂可将天然磷脂氢化获得或者人工合成,氧化还可以减少磷脂的氧化。其它膜成分的加入有时也是很有效的。例如用蛋卵磷脂制备的两性霉素B脂质体,如果加入麦角甾醇,比胆固醇能使药物更好地包裹在脂质体中。因为这些分子间能形成复合物。另外,如果蛋卵磷脂代之以完全饱和的卵磷脂,则麦角甾醇可以不加。再如在酒石酸锑钾脂质体膜材中加入正电荷磷脂,则由于药物与膜产生静电作用而使药物与脂质体紧密结合,减少了渗漏。
  如果制备的脂质体要使包裹成分尽可能快地释放,那么必须使膜具有较高的流动性,就应选择非常不饱和的磷脂(如大豆卵磷脂)。如果要在某一特定温度释放药物,就须选择不同脂质成分以调节其相应的相变温度。为了改变脂质体与其外部环境的相互作用,也可用改变膜组成的办法。例如糖酯的加入可以使脂质体与细胞上的受体结合,也可加入化学活性分子使脂质体表面与蛋白质结合。有些蛋白质可以直接作为膜成分在制备时加入。
  以上这些方法显示膜材组成可以改变脂质体的特性。由于脂质体应用目的的广泛性以及分子间的相互作用和与膜的作用都难以预见,所以很难给出一个一般的规律,在大多数情况下。人们只能采用可能的组成来进行一系列的试验以确定最佳组成及比例。
 
  2.脂质体结构的选择
 
  如前所述,脂质体的优点之一就是能包裹不同化学性质和大小的物质。脂溶性药物可嵌入脂质双分子膜,其包裹量的大小与膜材量成正比,而不依赖于所制脂质体的大小。因此,从原则上说,任何类型的脂质体都适于包裹脂溶性药物。但是在体内和体外试验中发现,镶嵌在脂质体外层表面的药物在与其它膜、固体表面或大分子蛋白质碰撞时很容易脱落,很难到达靶区,因此,最好选择多层脂质体以使药物能逐渐释放,因为在靶部位多层膜可以逐层降解。相反,如果脂溶性药物需要快速转运,就应选择制备小单层脂质体,由于在膜中脂质包裹的不规则性及小单层脂质体膜高度的曲率使之在生物分子存在的条件下,特别易受影响而发生转运与降解。
  包裹水溶性药物的脂质体应具有尽可能大的包裹容积,选择大单层和中等大小脂质体是最适合的类型,但大单层脂质体的缺点是膜的机械强度较弱,包裹物质容易损失。实际上,许多制备大单层脂质体的方法常同时产生大量的少层脂质体,它们具有2~3层双分子膜及较大的中心水性空间。此外,也可制备多层脂质体,其各双分子层之间含有较小的水性空间,在膜材中加入负电荷物质时,可使双分子层之间相互排斥,扩大水性空间。但多层脂质体的包裹容积仍然小于大单层脂质体。
 
  3.脂质体的粒径
 
  脂质体大小对其体内行为有着重要的影响。在体外实验中,一般只能观察到脂质体与某一特殊类型细胞之间的相互作用,及如融合、吞噬等依赖于膜组成的细胞与脂质体膜之间的转运,但在生物体内,脂质体的大小决定了其在体内与细胞作用的部位。如静注条件下,小的脂质体能够通过肝窦状隙很快到达肝细胞;中等大小的脂质体能够在血循环中保持相当一段时间;较大的脂质体则缓慢地通过肝窦状隙,然后迅速被枯痞氏细胞摄取;更大一些的脂质体能被肺组织摄取而清除出循环系统。因此,除脂质体与细胞间的受体 - 介质相互作用和依赖于脂质体膜的蛋白质摄取作用外,脂质体大小的不均一性实际上是影响脂质体体内行为的重要因素。
 
  四、脂质体的作用特点
 
  脂质体被认为是一种具有多种功能的定向药物载体。脂质体有如下作用特点。
 
  (一)脂质体的靶向性
 
  靶向性是脂质体作为药物载体最突出的优点。脂质体的靶向性有四种类型。
 
  1.天然靶向性
 
  天然靶向性是脂质体静脉给药时的基本特征。这是由于脂质体进人体内即被巨噬细胞作为外界异物吞噬的天然倾向产生的。一般的脂质体主要被肝和脾中网状内皮细胞(phagocytic cells)吞噬,是治疗肝寄生虫病、利什曼病等网状内皮系统疾病理想的药物载体。使用脂质体包封药物治疗这些疾病可显著地提高药物的治疗指数,降低毒性,提高疗效。脂质体的这种天然靶向性也被广泛用于肝肿瘤等的治疗和防止淋巴系统肿瘤等的扩散和转移。脂质体不仅是肿瘤化疗药物的理想载体,也是免疫激活剂的理想载体。
 
  2.隔室靶向性
 
  隔室靶向性是指脂质体通过不同的给药方式进人体内后可以对不同部位具有靶向性。例如,脂质体可以静脉、腹腔内、肌内、皮下或淋巴结注射,也可以支气管给药或大脑内、脊椎内、关节腔内给药。这样脂质体可以通过各种给药方式进入体内不同的隔室位置,产生靶向性。例如在关节腔内注射含2mg可的松棕榈酸酯的大多层脂质体,病人自我感觉改善,用药后48h内作用显著,经两周时间方逐渐回复到原来症状。因而认为,由于磷脂等材料对细胞膜的亲和性,即使仅用含l/25常规剂量甾体的脂质体,也有可能暂时缓解风湿性关节炎病人的滑膜炎症。在组织间或腹膜内给予脂质体时。由于隔室的特点,可增加对淋巴结的靶向性。
 
  3.物理靶向性
 
  这种靶向性是在脂质体的设计中,应用某种物理因素的改变,例如用药局部的pH、病变部位的温度等的改变而明显改变脂质体膜的通透性,引起脂质体选择性地在该部位释放药物。目前物理靶向性设计最成功的例子是温度敏感脂质体(temperature-sensitive  li。如前所述,在相变温度时,脂质体的磷脂膜产生从胶态过渡到液晶态的物理转变,大大增加脂质体膜的通透性,包封药物释放速度加快。按一定比例混合含不同长链脂肪酸结构的磷脂酰胴碱,可产生预期的相变温度。例如,若脂质体的相变温度约为42℃,将治疗区(如癌肿区)局部升温至42℃,当温度敏感脂质体进人这一区域的毛细血管床时。脂质体发生相变,同时在某种血浆成分(主要是脂蛋白)作用下,脂质体迅速完全地释放药物,扩散后使血管内外的药物浓度达到平衡。这种物理靶向性不需要脂质体离开毛细血管。Weinstein等证明,使用温度敏感脂质体,可使标记的甲氨蝶呤[H-MTX]在局部升温的肿瘤区的摄取量增大10倍以上,并抑制肿嘲的生长。有人将局部升温与放疗和化疗结合起来,其治疗效果更好。另外,若干动物和人体的肿瘤间质液的pH比正常组织姓著为低,某些包封有甲氨蝶呤等弱离子性药物的脂质体,在进人体内后,可以选择性地在肿瘤的低pH局部释放药物。这种受pH影响释放药物的脂质体称为pH敏感的脂质体(pH—sensitive liposomes),制备pH敏感脂质体可用对pH敏感的类脂,如N-十六酰-L-高半胱氨酸(N-palmitoyl-L-homocysteine,PHC),游离的高半胱氨酸。这些类脂因pH不同,存在二种平衡结构,一种是开链式,一种是环式,例如PHC的平衡构型为:

      
  pH降低时,闭合的PHC是一种中性类脂,破坏脂质双层的稳定性,脂质体内的药物不断释放出去。用超声法制备各种比例DPPC、DSPC(二硬脂酰磷脂胆碱,distearoyl phosphatidyl choline)和PHC的羧基荧光素(CF)脂质体,测得CF的释放是温度和pH的函数。由12%PHC和88%DPPC制备的pH敏感脂质体,具有温度和pH的交互作用,在33℃时pH显示的差异最大(pH6.8~7.4)。Yatvin等设计了一种pH敏感脂质体,该脂质体除利用体内局部组织的低pH环境外,还利用外加磁场的作用,使包封的离子性药物在指定区域释放出来。
 
  4.配体专一靶向性
 
  这种靶向性是在脂质体上连接某种识别分子,即所谓的配体。通过配体分子的特异性专一地与靶细胞表面的互补分子相互作用,而使脂质体在靶区释放药物。目前已有人将几种不同类型的配体连接到脂质体的表面,形成不同类型配体改进的脂质体。这些不同类型的配体有:糖、植物凝血素、肽类激素、小半抗原、抗体和其它蛋白质。例如表面带有半乳糖残基的脂质体,为肝实质细胞所摄取;带有甘露糖残基的脂质体为枯痞氏细胞所摄取。利用****存在去唾液酸半乳糖受体,半乳糖分子一半露在外面的脂质体,在****的聚积程度比不含这种糖酯的脂质体高。连接不同配体的脂质体,对不同的受体细胞具有专一的靶向性。因此,人们可以根据治疗或给药的需要,来选择脂质体的配体。
 
  (二)脂质体的长效作用
 
  脂质体作为药物载体还具有长效作用。实验证明,脂质体及包封的药物在血循环中保留的时间,多数要比游离药物长得多。体内动力学研究指出:不同的脂质体药物在体内的存留时间,可以从几分钟到几天。据报道,使用神经鞘磷脂或二硬脂酰磷脂胆碱制成的脂质体,在体内有更长的存留时间。根据需要,可以通过磷脂的选择,设计具有不同半衰期的脂质体作为长效的药物载体。这种药物载体,使药物缓慢地从脂质体中释放出来,在细胞的生命周期中更好地发挥作用,从而提高治疗指数。如果脂质体以非静脉注射进人体内,脂质体将发挥药物贮库(depot)的作用,即使脂质体已经与细胞和组织结合,甚至它们被细胞内体吞噬后,仍可以缓慢地释放药物。药物的释放速率显然与脂质体的组成和类型有直接的关系。实验指出,使用DSPC和胆固醇制备的脂质体,在循环中破坏很慢,包封在这种脂质体中的药物释放也需较长时间。药物从多层脂质体释放需要透过多层磷脂膜向外渗透,所以药物从多层脂质体释放比相同组分的单层脂质体为慢。利用脂质体缓慢释放药物的特点可以有效地延长药物在体内的半衰期。例如氢化可的松衍生物脂质体直接注射到关节腔治疗关节炎,不仅有明显的消炎作用,而且脂质体作为药物贮库在炎症部位恒速释放药物。如果使用某种配体靶向脂质体作为药物贮库系统将进一步改善治疗效果,这种脂质体可到达体内最理想部位恒速释放药物。
 
  (三)脂质体降低药物毒性
 
  药物被脂质体包封后,主要被网状内皮系统的吞噬细胞摄取,故在肝、脾和****等网状内皮细胞较丰富的器官中有较高浓度,而在心脏和****中的累积量比给予游离药物时低得多。因此,如果将那些对心和****有毒性的药物,尤其是对正常细胞有毒性的抗肿瘤药物,包封成脂质体可以明显降低药物的毒性。例如,阿霉素是临床常用的被认为是疗效确切的抗肿瘤药物,在肿瘤联合化疗和综合治疗中占有很重要地位。但由于它有较严重的毒副作用如较高的心脏毒性、****抑制等而限制了它的长期使用和对心脏病患者的应用。如将阿霉素包封在脂质体中,则可明显降低其毒性,不仅扩大了阿霉素的使用范围,而且提高了疗效。阿霉素脂质体注射剂已于1995年获美国FDA批准。
  两性霉素B是有效的抗真菌药物,但它对多数哺乳动物的毒性较大,如将其包封成脂质体,同样可以明显降低毒性而又能提高抗真菌的活性,在很大程度上提高药物的治疗指数。两性霉素B脂质体,已成为世界上上市的第一个静脉用脂质体,在十几个国家获准用于治疗全身性真菌感染。国内研制的两性霉素B脂质体亦已进入临床研究。
 
  (四)脂质体提高被包封药物的稳定性
 
  实验证明,将一些不稳定或易氧化的药物包封在脂质体中,药物因受到脂质体双层膜的保护,可显著提高稳定性。同时,脂质体也增加药物在体内的稳定性,因为药物进入靶区前被包在脂质体内,使药物免受机体酶和免疫系统的分解;当进人靶区后,脂质体和细胞相互作用或被细胞内体摄取,经溶酶体的作用,脂质体解体并释放出药物。
 
 
 
第二节  脂质体的制备
 
 
 
 
  脂质体制备的关键是使磷脂膜形成均一的脂质体.并达到需要的大小及形成合适的结构。使被包裹物质具有较高的包封率且不易从脂质体中渗漏。
  可以说所有制备脂质体的方法都包括三至四个基本步骤:脂质的干燥;脂质分散于水性介质中;脂质体的纯化;最终产物的分析。各种方法之间主要的区别在于第二步,这里按照分散类型将制备方法归类,有机械分散法;溶剂分散法;乳化法等。
 
  一、脂质的制备和处理
 
  (一) 卵磷脂的提取及精制
 
  1.粗磷脂的提取
 
  蛋黄中磷脂的含量约10%。常用的抽提溶剂有己烷、石油醚、苯、甲醇、乙醇、****、氯仿等。磷脂不溶于丙酮等低极性溶剂,因此提取时把溶解和沉淀磷脂两种工艺结合使用。
  常用的方法是二元溶剂抽提法。一种方法是先用丙酮处理蛋黄,除去脂肪、甾醇、色素、水等而让磷脂沉淀,然后用氯仿-甲醇二元溶剂抽提磷脂,再用丙酮沉淀,最后蒸去溶剂。例如,将蛋黄一个与丙酮40ml搅拌混合后离心分离,弃去上清液。用氯仿-甲醇(2:1)40ml抽提丙酮不溶物,抽提液用氮保护,在40℃水浴上减压浓缩至近干,将产品加入丙酮100ml沉淀磷脂,倾出丙酮,再按卜述条件减压干燥,即得粗磷脂。
  另一法足先用氯仿-甲醇抽提,再用丙酮沉淀。例如,将蛋黄一个与氯仿-甲醇(2:1)90ml搅拌混合后,过滤,滤液用1%NaCl水溶液50ml洗,分离后用无水硫酸钠干燥。过滤,加入抗氧剂和沸石,在水浴上浓缩至近干。向浓缩物加丙酮30ml,冰水冷却约15min沉淀磷脂,过滤,水浴蒸干即得蛋黄粗磷脂。
 
  2.卵磷脂的精制
 
  粗磷脂经柱层析分离即可得纯度较高的卵磷脂。例如,使用中性氧化铝层析柱,以氯仿 - 甲醇(9:1)为流动相,上述粗磷脂制成浓度为5%的氯仿溶液,接收液每25ml为一份,用薄层色谱法检查纯度,将含有纯卵磷脂的接收液集中蒸干,即得精制卵磷脂。
 
  (二)脂质的稳定化
 
  由于磷脂极不稳定,容易氧化和降解,因此磷脂应贮存在-20℃的低温下或溶解在有机溶剂中,也有人将磷脂置丙酮中于低温贮存。为了将氧化速率降到最小,可贮存于-70℃条件下。常用的有机溶剂是氯仿-甲醇(2:1)混合物,这个溶剂系统可以溶解绝大多数脂质成分。所用的溶剂应是高纯度的,因为即使是混有极少量的杂质一经干燥浓度就增加了,特别是有些杂质可能具有化学活性,可以引起脂质的变质,如****降解产生的过氧化物和氯仿降解产生的****(碳酰氯)等。****的形成可以通过在氯仿中加入1%的乙醇来阻止,大部分市售氯仿都采用此法。所有的脂质溶液都应避光贮存,为了防止脂质的氧化。还可以充入氮气。
  脂质体制备一般都是从膜材的有机溶液开始,这是为了保证所有膜材组成能达到均匀一致,在制备过程中,如果被包裹药物是脂溶性的,则应加在有机溶液中,而水溶性药物则可溶于水性介质中。
  大量有机溶液的干燥可采用旋转蒸发器来进行,通常使用的条件是水浴加热(20~40℃)及减压蒸发(0.0533~0.0933MPa)。烧瓶的快速旋转可以增加蒸发的表面积,为了防止脂质氧化可以通入氮气。
 
  二、脂质体的制备方法
 
  (一)机械分散法
 
  机械分散法(mechanical dispersion)通常是先将脂质干燥并使之均匀贴附在玻璃容器的内壁,然后加入水相介质通过振摇将脂质分散并形成脂质体。有人认为在加水分散之前,脂质膜中的亲水基与疏水基已经互相分离并定向排列,但并不是以所制得的脂质体的形式排列。在水化过程中,脂质发生溶胀并被一层层洗脱,采用此类方法一般都形成多层脂质体,包封在脂膜内的水相容积仅占总容积的很小部分,约5%~10%。因此。不太适于包裹水溶性药物,而对脂溶性药物,其包裹率甚至可高达100%。
根据具体实施过程,机械分散法可分为以下四种基本方法。见图20—5。

       
  1.手摇法(hand-shaken method)
 
  手摇法是机械分散法中最简单也是使用最广泛的方法,因使用人工振摇使脂膜溶胀、洗脱而得名。为了使磷脂质在容器内壁形成很薄的膜以获得尽可能大的表面积,建议使用大容积的茄形瓶,即使有机溶液或水性介质的体积很小,甚至只有1 ml,也应使用50或100ml的容器。干燥温度须控制在脂质组分的相变温度之上,但温度太高或者在制备时形成十分厚的膜,洗脱就比较困难。一旦形成脂块就不易分散,在这种情况下,可以在茄形瓶中加入玻璃珠帮助脂质分散,玻璃珠的直径一般为0.5~3mm。
  完全由中性脂质组成的多层脂质体双层膜之间非常紧密,其中的水性空间很小,药物在双层膜之间的分布常是不均匀的。若加入负电荷脂质可使双层膜之间互相排斥,从而显著增大水性药物的包裹容积。在采用中性脂质时,通过重复冰冻-融化过程,亦可达到同样的效果,包封率可达30%,提高脂质浓度可增加包封率。该法制备的脂质体直径一般为几微米。
 
  2.非振摇法(non-shaken method)
 
  该法一般形成多层脂质体。但在一定条件下,亦可形成具有较高包裹容积的大单层脂质体。该法最早由Reeves和Dowben提出,常使用蛋卵磷脂或脑磷脂,以及使用蒸馏水或不含电解质的溶液,带电离子可使双分子层之间的引力增大,溶胀时不利于相互间的分离。本法中脂质的水化和溶胀分二步完成,先使脂质在一较大的锥形瓶底自然蒸发溶剂形成薄膜,然后通人氮饱和的水蒸气约15~20min使膜水化.再加入较大体积的溶液溶胀.在37℃静置2h,溶胀后轻轻晃动锥形瓶即形成大量脂质体。利用多层脂质体和大单层脂质体在溶液中的不同比重,可用离心法分离。这种方法所形成的脂质膜的优劣主要取决于所用脂质的性质,一般而言,脂质混合物比单一磷脂质好。该法选用的溶剂是体积比为1:2的氯仿-甲醇溶液,这种配比与玻璃壁的接触角较小,在边缘不会使脂质层加厚。
 
  3.前体脂质体(pro-liposoomes)法
 
  这种方法是将脂质吸附于极细的水溶性载体上,如粉末氯化钠、山梨醇或其它的聚合糖类,以增加脂质分散的表面积。当这种“前体脂质体”与水接触时,脂质溶胀而载体迅速溶解,在水相中形成多层脂质体。载体颗粒的大小将影响最终形成的脂质体的大小和均匀性。
在载体吸附脂质的过程中,干燥温度是控制脂质颗粒粒径及分布均匀性的关键。实验室制备时通过改进旋转蒸发器即将一热电偶安置于烧瓶内壁就能有效地控制干燥温度。
  在所有的载体中以山梨醇最引人注目。原因之一是因为临床上易于接受;之二是因为山梨醇溶液比其它小分子量的载体溶液具有较低的渗透性,且山梨醇颗粒具有多孔性特征,实际可利用的表面积比按颗粒外表面积计算的要大得多,约为33.1m2/g。例如用山梨醇负载1g脂质,覆盖率为6mg/m2,表面平均只有几层双分子层。而烧瓶内壁的覆盖率大约为1Og/m2。用这种方法较多地形成小的脂质体。如以二肉豆蔻酰磷脂胆碱(dimyristoyl phosphatidyl choline,DMPC)和二肉豆蔻酰甘油磷脂(dimyristoyl phosphatidyl glycerol,DMPG)混合物(摩尔比7:3)制备多层脂层体,用手摇法制备的脂质体平均直径为1.8µm,而用前体脂质体法制备的平均直径仅为0.13µm。前体脂质体粒径随着脂质负载量增加而增大,引人负电荷脂质则粒径减小。
  前体脂质体法在工业上很有发展前景,除可能实现规模化生产外,大量的前体脂质体在水化前便于贮存,克服了脂质体之间的相互凝聚,重新混悬时又很易分散。显然该法更适于包裹脂溶性药物。
  任何脂质都可采用此法。在应用低熔点的脂质(如蛋卵磷脂)时则特别要注意温度不能太高,否则颗粒容易结块,熔点高的脂质不存在这个问题。制备时也可使用任何能溶解脂质的溶剂,如用甲醇或乙醇,但必须保证在温度升高时山梨醇不溶解,且必须保持较高的真空度以使溶剂快速蒸发。如果应用高熔点脂质的氯仿溶液并以山梨醇为载体,条件控制就不那么严格,也可以不用热电偶控制温度。
  载体可以是多孔或无孔的,例如用无孔的氯化钠则操作时应注意勿使载体过湿以防溶解,使用无孔载体较易除去溶剂,因为溶剂不进入到颗粒内部。粉末氯化钠的表面积为0.12m2/g,增加脂质负载量则双分子层增厚,因此水化后所形成的脂质体要比以山梨醇作载体的为大,由于脂质暴露于颗粒表面,易于结块,因此只能使用高熔点的脂质。 中国药科大学同位素实验室研究方向:蛋白质药动学 多肽药动学 蛋白质多抗制备等 www.yaodongxue.cn
 
  4.冰冻干燥法(freeze-drying method)
 
  冻干法是又一种在加入水相前脂质分散成细末状的方法。所选溶剂的冰点应高于冻干冷凝器的温度,且对大多数冻干保护剂显示惰性。经常选用的溶剂是叔丁醇,也有文献报道不使用有机溶剂,而直接将磷脂分散在水溶液中冷冻干燥。冻干后的脂质呈疏松状,当加入水相或含有药物的溶液时,在相变温度之上很快形成多层脂质体。例如,2.5g蛋卵磷脂分散在0.067mol/L。磷酸盐缓冲液(pH7)与0.9%NaCl溶液(1:1)的混合液中,超声处理,然后与甘露醇混合,冷冻干燥,随即用12.5mg维生素B12的上述混合液进行分散,得到脂质体混悬液。
 
  (二)用物理手段水化脂质的方法
 
  这类方法主要是用于改善脂质体的大小及特性。例如在将干燥脂质水化制成多层脂质体后,为了增加脂质体的包裹容积及减少双分子层的层数,设计了一系列降低其大小的方法,这些方法包括微乳化法、挤压法、超声法等。
 
  1.微乳化法(micro-emulsification)
 
  该法系采用微量液化器将浓缩脂质混悬液制成较小的多层脂质体。微量液化器的主要构造是在高压下可使混悬液通过的特定孔径过滤器。将脂质或者粒径较大的多层脂质体的混悬液,或者直接将脂质粘稠物的水性分散液加到该装置中,液体通过高压泵的作用和过滤器反复循环直至获得适当大小的脂质体。
  通过一次循环,脂质体的直径可达0.1~0.2µm,其大小分布取决于所用脂质的性质及水性介质的性质。加入负电荷脂质能减小脂质体直径,增加胆固醇则使脂质体变大。反复循环可使脂质体大小达到一稳定值。但也有例外,如阿霉素脂质体在长时间反复循环的情况下反而会变大。
  这种仪器的流量为90ml/min,最小循环用量为15~20ml,每分钟可以循环4次,因此一次制备时间小到10min。该仪器也可用于大量制备脂质体。这种方法的优点是可以使用高浓度的脂质(20%以上),而一般传统方法则不可以。该法利于包裹水溶性药物,据报道当脂质浓度达到约20mg/ml时,包封率可达70%。
 
  2.超声法(sonication)
 
  这是最早使用且现在仍被广泛使用的一种方法。例如,将水溶性药物溶于磷酸盐缓冲液,加入磷脂、胆固醇与脂溶性药物共溶于有机溶剂的溶液,搅拌蒸发除去有机溶剂,残液经超声波处理,然后分离出脂质体,再混悬于磷酸盐缓冲液中即制成脂质体混悬液。
  超声波仪有探头型(probe sonication)与水浴型(bath sonication)两种。探头型功率大,耗时少,但探头磨损的金属屑可能污染制剂,或导致类脂降解,同时使溶液产生气雾,这在包封放射性同位素与抗癌药物时危险较大。水浴型是在密闭系统内进行工作,可避免这些问题,但功率小,费时间。为了获得可重现的直径最小的脂质体,需要注意超声时间,盛放类脂器皿的形状,溶液的体积,以及器皿在水槽中的位置等操作细节。此法得到的脂质体小而均匀。缺点是包裹容积低,混合类脂在双分子层膜的内外分布不均匀。
 
  3.French加压挤出法
 
  将多层脂质体置于French压力机,在137.895MPa压力下反复挤出可获得15~30nm大小的单层脂质体;在低压下(20.684MPa)则生成50~150nm中等程度的单层脂质体。这种方法简单、重现性好,不需要离心、凝胶过滤、透析、浓缩等操作。而制备条件温和,可用作蛋白质等生物分子脂质体的制备。该法可用较高类脂浓度来制备大容积的脂质体,包封率比较高。
 
  4.膜挤压法(meambrane extrLision metlaod)
 
  这种方法是在一定压力(<0.689MPa)下使脂质体通过一具有很小孔径的过滤膜。过滤膜分二种类型,一种是所谓“曲径”的灭菌过滤膜,这是一种由交联聚合物制成的多孔径的纤维膜,液体从一侧经过曲折孔径到达另一侧,孔径的平均直径由纤维膜的密度控制。由于孔径的曲折性,那些比孔径大的脂质体被吸附,不能到达膜的另一侧。
  另一种过滤膜是由核粒子辐射穿透聚合物所形成的“核孔”膜,与“曲径”膜不同,大于膜孔径的脂质体也能通过,这是由于在一定压力下脂质体内在的柔性使其能挤过膜孔。过大的脂质体可在过滤过程中破裂,这样反复几次就能获得大小均匀的脂质体,其直径一般比孔径略小。
  脂质体的挤出过程比较简单,只要将脂质体悬液加入,必要时搅拌,在一定的压力下挤压过膜即可。脂质体通过一定孔径膜的速率取决于脂质体的大小及浓度、脂膜中胆固醇含量及所用磷脂的饱和度。脂质体膜流动性越好越易通过。在压力为0.483MPa时,脂质浓度为50mg/ml的多层脂质体悬液挤压通过0.2µm孔径膜的流速为0.1~0.5ml/min,几乎无残留物。随挤压次数增加,膜流动性增加,脂质体粒径减小。偶尔也会发生流动性反而下降的情形,此时应除去残留物并冲洗膜,或者将残留脂质体稀释后再挤压。
 
  5.干燥重建脂质体(dried-reconstituted vesicies,DRV)
 
  这是第三种先使脂质形成很细的固体形式、再在介质中分散成脂质体的方法,同时也使用了冰冻干燥技术。与前述前体脂质体制法不同的是没有载体,而是将不含药的小单层脂质体悬液冰冻干燥,再加入水,重新水化、融合,形成具有较高包封率的脂质体。
  这种方法是将被包裹的水溶性药物加入不含药的小单层脂质体悬液中,然后二者一起冻干(见图20—6)。由于脂质和药物的紧密接触,因此再次混悬时易于获得较高包封率的脂质体。当然也可以在最后一步加入药物,但认为二者一起冻干效果较好。

   
  用这种方法制得的脂质体通常是单层或少层的,约1µm或更小,包封率不定,常在40%左右,脱氧核糖核酸能达到70%,而手摇法制得的多层脂质体包封率一般仅为2%~10%。对低分子量的药物,冻干前的稀释将影响最终的包封率,增加Na+或KCl浓度将使包封率增加,而增加糖的浓度将令包封率下降,可能是由于这些糖起冰冻保护作用,阻止膜的破裂和融合,而此过程正是该法中必要的有利步骤。
  这是又一种成功地利用冻干技术的方法,DRV法的优点除了对水溶性药物具有较高的包封率外,还没有剧烈的制备条件。缺点是在冻干前脂质体须是单层脂质体。若为多层脂质体则包封率不高。
 
  6.冰冻 - 熔融超声法(简称冻融法,freeze-thawing sonication method,FTS)
 
  冻融法制备脂质体是先采用超声法制备未包封药物的小单层脂质体,冷冻前将待包封的药物加入,在快速冷冻过程中,由于冰晶的形成,使脂质体膜破裂,形成冰晶片层与破碎的脂膜共存状态,在缓慢融化时,暴露出的脂膜互相融合重新形成脂质体。经再次短时间(15~30s)超声,几乎不会降低包裹容积。
  冻融法制备脂质体有以下特点:①此法不使用有机溶剂,避免了残余有机溶剂毒性的可能性;②提高水溶性药物的包封率,可达30%以上;③制备方法简单,可采用粗磷脂制备脂质体,制得的脂质体有较低的渗透性,在溶液中稳定;④冻融法制备脂质体必须避免糖类及高电荷强度离子如二价阳离子,因为它们会干扰冻融过程,并减少包裹容积。高分子电解质也减少包封率。
  另一种略作改变的冻融技术是使用低渗缓冲液渗析法来代替最后的超声处理。先将一定浓度的盐溶液与小单层脂质体混合,反复冰冻 - 熔融几次,再加入低渗缓冲液,在冰晶融化的同时脂质体膨胀,由于渗透压差异使脂质体破裂,当它们再度相互融合时即形成大量的直径为10~50µm的大脂质体。该法可以使用任何比例的磷脂组成,加入负电荷脂质可以达到相当高的包裹容积(20µl/mg脂质),较使用中性磷脂增加一倍。
 
  7.pH诱导囊化法(pH-induced vesiculation)
 
  多层脂质体能基于静电作用通过pH的改变而不必经超声或高压形成单层脂质体,该过程称为pH-诱导囊化法。由于pH的急剧改变,引起脂质双层表面电荷密度的增加,若达到某一临界值,即发生自发的囊化。
  诱导过程中,先使脂质体处于某一较高pH状态,例如加入1mol/L NaOH使介质迅速达pH11,控制脂质体在该pH条件下的时间,一般不超过2min,否则会引起磷脂的降解。再加入0.1mol/L HCl诱导至pH7.5,即得到直径为20~60nm的小单层脂质体。
  作为一种静电现象,pH-诱导囊化法并不依赖于pH调节剂的性质。因为磷脂含有可离子化的两性基团,所以只要能使这一基团整个离子状态发生改变的任何调节剂均可产生pH诱导作用。
 
  8.钙诱导融合法(calcium-induced fusion)
 
  这一方法是利用由酸性磷脂组成的小单层脂质体,在钙离子存在下发生缔合后冉融合的作用形成大单层脂质体。例如在磷脂酰丝氨酸所形成的小单层脂质体中加入钙离子,使之相互融合,加入EDTA经螯合除去钙离子,即产生大单层脂质体,直径在200~1000nm之间。该法的包封率依赖于所用脂质的浓度。其特点是形成的单层脂质体容积大,条件缓和,可包封DNA、RNA等生物高分子。
 
  (三)溶剂分散法
 
  溶剂分散法(solvent dispersion)是先将脂质溶于有机溶剂中,再加入到含有被包裹药物的水相中,在有机相与水相交界面上磷脂质以单分子层(即脂质体双分子层膜的一半)排列。溶剂分散法按溶剂系统性质分成三类:①有机溶剂能与水相混溶;②有机溶剂不能与水相混溶,水相是大量的;③有机溶剂不能与水相混溶,而有机相是大量的。
 
  1.乙醇注入法(ethanol injection method)
 
  将脂质的乙醇溶液通过一注射针头快速注入大量的水性介质中(图20—7)。注射压力使乙醇与水充分混合,乙醇在瞬间被稀释,磷脂分子在水相中达到均匀分散,并相互缔合,此法能形成高比例的小单层脂质体(直径约25nm)。若混合不够充分和快速,可能会使脂质发生凝聚或形成较大的脂质体,该法的优点是过程极其简单,且不会引起脂质降解。它的主要缺点是脂质在乙醇中的溶解度有限,形成的脂质体悬液相当稀,所以当包裹水溶性药物时包封率极低,且乙醇不易除去。

  必要时,可在低压下经超滤富集脂质体,乙醇则可通过渗析等法除去。
 
  2.****注入法(ether injection method)
 
  ****注入法与乙醇注入法不同,它是将与水不相混溶的****溶液通过一注射针头缓慢地注入水相介质,在一定温度下****被蒸发除去,得到粒径较大的脂质体(图20—8)。该法如何形成大脂质体的机制尚不清楚。可能是由于溶剂的缓慢蒸发使界面的脂质单分子层最终形成双分子层,双分子层再重叠形成封闭的脂质体。

  ****注入法尤适用于易氧化降解及热敏感的脂质,由于溶剂在加入时即被除去,且该过程可持续不断地进行,因此对脂质浓度没有限制,可形成高浓度的脂质体。该法的缺点是费时。为了有效地控制脂质溶液的注入速度,最好采用机械注入泵。该法制得的脂质体粒径大约在0.1~1.5µm,包裹容积为10~15L/mol磷脂。
  饱和脂质如二棕榈酰磷脂胆碱在单纯****中的溶解度较小,可使用含20%甲醇的****溶液,溶解度可增加5倍。,若包裹物质对高温敏感,则可在减压下进行。
 
  3.二次乳化法(double emulsion)
 
  本法先将少量的缓冲液与多量的含磷脂的有机溶剂进行第一次乳化,形成W/O型反相胶团。减压除去一部分溶剂或完全不除去溶剂,然后加入较大量的缓冲液进行第二次乳化,形成W/O/W的复乳系统。该系统的乳滴具有多个内水相液滴,各个水相液滴被有机溶剂 - 水界面上的磷脂单分子层分隔,单分子层的疏水面向着分隔的有机溶剂。当减压蒸发除去有机溶剂时,即形成中等大小的脂质体。
  一般而言,在该法中,水溶性物质的包封率主要取决于其本身的性质,脂质组成对其影响较小。例如牛血清白蛋白、胰岛素等包封率可达50%~80%,但菊粉和蔗糖在同样条件下的包封率仅为10%。
 
  4.逆相蒸发法(reverse-phase evaporation method)
 
  本法是将磷脂溶于****等有机溶剂,加入待包封溶质的水溶液(水溶液:有机溶剂为1:3至1:6),进行短时超声,直到形成稳定的W/O乳剂,然后减压蒸发除去有机溶剂,到达胶态后,另加入适量缓冲液,旋转蒸发使器壁上的凝胶脱落,然后在减压下继续蒸发,制得脂质体的水性混悬液,最后可采用渗析法除去微量的有机溶剂。
  此法用来制备大单层或少层脂质体,适用于各种药物和生物活性物质。药物的包封率一般在50%左右。此法可用各种脂质及脂质混合物,同多层脂质体或小单层脂质体相比,脂质体的水相容积较大,可达7~11L/mol磷脂。逆相蒸发法的优点是对各种化合物都具有较高的包封率,由于不需要将磷脂质干燥这一步骤,所以脂质体的大小、包封率都具较好的重现性。这种方法的缺点是需要短时间超声处理,且有机溶剂要与所包裹物质接触,并要在减压条件下蒸去有机溶剂,这些条件限制了一些不稳定药物的包裹。
 
  5.复乳法(multiple emulsion method)
 
  本法的操作分二步,第一步,将类脂溶于氯仿,加入待包封药物溶于150mmol/L的蔗糖溶液,振摇形成W/O的乳剂,称为“子液”;另取与“子液”等量的类脂溶于****,加到200mmol/L的蔗糖溶液中,振摇形成O/W乳剂,称为“母液”。第二步,将“子液”加入“母液”中,立即振摇,形成氯仿微球,内含水滴,然后在直径为8cm平底烧瓶中铺成薄层,通氮不断振摇,维持氯仿微球呈混悬状态,在37℃水浴中,蒸发除去溶剂。加等量5%葡萄糖溶液,经600g离心得到大单层脂质体。平均直径为9.2µm.包裹容积达144µl/mg磷脂,比逆相蒸发法制得的脂质体(15.6µl/mg磷脂)高得多。这种脂质体与原生细胞极相似,是一种优良的生物膜模型。
 
  (四)其它制备方法
 
  1.表面活性剂处理法(detergent handling)
 
  脂质薄膜、多层脂质体或单层脂质体与胆酸盐、脱氧胆酸盐等表面活性剂混合,通过离心法或凝胶过滤或透析法等除去表面活性剂,当表面活性剂逐渐除去时,磷脂质就形成单层脂质体结构,这种方法可以获得比较均匀的小单层脂质体(直径约30~180nm),如三磷酸腺苷酶脂质体的制备。本法来自重组膜的技术,可适用于各种类脂的混合物,适用于包封酶及其它生物高分子,但不适于由单一的酸性磷脂所组成的脂质体。所形成的脂质体的粒度分布依赖于类脂与表面活性剂的比例、胆固醇的用量和透析速度。表面活性剂去除率如用透析法300h为99.3%(每1000个磷脂分子中尚存表面活性剂分子7个),葡聚糖凝胶过滤法数小时即达99%。
  这种方法的优点是革除了蒸发步骤而不需提高温度,适于在平缓条件包裹一些不稳定物质。缺点是在最后的脂质体悬液中残存表面活性剂。
 
  2.两性物质负载法
 
  根据前面所描述的一系列方法,水溶性药物可溶解在水性介质中,在脂质体形成的某一阶段被加入而包裹到脂质体中。而有些物质如一些呈两性的物质和带有可离子化基团的物质,由于其本身的脂溶性与水溶性使其很容易透出膜外而常常难以保留在脂质体内。使用“两性物质负载法”则是利用物质的解离性质,即制备时使该物质以非电荷状态通过膜扩散进入脂质体,而进入脂质体后则以不能穿透脂质体膜的完全电荷化状态存在,因为离子化可使其亲脂性下降,渗透性降低。离子化可通过调整脂质体膜两侧不同pH条件来实现,例如,在脂质体内包入一非渗透性的缓冲离子如谷氨酸盐等形成低pH环境,而混悬分散脂质体的介质可采用pH7.0的等渗等摩尔浓度的缓冲液,或者可在膜组成中加入带电荷脂质,然后调节混悬介质至中性(图20—9)。通过上述方法的使用可包裹一些特殊的具解离性质的药物。

  
 
  三、不同类型脂质体的制备特点
 
  (一)多层脂质体
 
  多层脂质体是脂质体中最简单的类型,一般可大量制备且重现性较好。多层脂质体可贮存较长时间保持稳定,在实验室可用手摇法制备。若脂质体大小有限制可用挤压法制备。
  由于多层脂质体的内部存在着脂质膜,因此更适于作为脂溶性药物的载体,而对于水溶性药物,当使用传统的制备方法时,一般包封率极低。但若符合下列条件则包封率可达50%或更高,包括:多层脂质体很大;脂质浓度很高(约300mg/ml)或使用特殊的方法如干燥重建法,或二种方法联合使用等。
 
  (二)小单层脂质体
 
  这种脂质体的大小有一定限制,制备时通常需要较高的能量,因此有可能会使脂质发生氧化或水解。且它们属热力学不稳定系统,特别在低于相变温度时,容易凝聚和融合。另外在小单层脂质体中,磷脂质在膜上表现出不同的曲率。它们的包裹容积小,对于水溶性物质的包封率相对较低。但由于小单层脂质体制备方便且大小和双分子层均一,因而在过去几十年中被广泛地研究。通过选择合适的脂质组成可以改善小单层脂质体的稳定性,可用作需要较高膜表面积或亲脂性物质在膜之间相互转运的模型。目前尚无适用于大规模制备小单层脂质体的方法。如水浴超声法,其能量不足以快速地处理具较高脂浓度的小单层脂质体,而乙醇注入法使脂质被大量水性介质所稀释。实验室少量制备常用探头超声法或French挤压法。
 
  (三)大单层脂质体和中等大小脂质体
 
  这种类型的脂质体具有较高的水/脂容积比即包裹容积较大,对水溶性药物可获得较高的包封率。前述逆相蒸发法、复乳法、冻融法、挤压法、表面活性剂处理法等都可用来制备大单层脂质体和中等大小脂质体。这种脂质体比较适于包裹水溶性物质。

 

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