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PCR污染及解决对策
作者:蛋白质药…    文章来源:www.yaodongxue.cn    点击数:    更新时间:2011-3-19          【字体:

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PCR检测微量感染因子时,一定要注意产物残留污染的问题。
一. 污染的预防

进行PCR操作时,操作人员应该严格遵守一些操作规程,最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。

(一)划分操作区:目前,普通PCR尚不能做到单人单管,实现完全闭管操作,但无论是否能够达到单人单管,均要求实验操作在三个不同的区域内进行,PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行:


1. 标本处理区,包括扩增摸板的制备;
2. PCR
扩增区,包括反应液的配制和PCR扩增;
3.
产物分析区,凝胶电泳分析,产物拍照及重组****的制备。


各工作区要有一定的隔离,操作器材专用,要有一定的方向性。如:标本制备→PCR扩增产物分析产物处理。
切记:产物分析区的产物及器材不要拿到其他两个工作区。

(二)分装试剂:PCR扩增所需要的试剂均应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加样器和吸头需固定放于其中,不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA
1
PCR用水应为高压的双蒸水;
2
引物和dNTP用高压的双蒸水在无PCR扩增产物区配制;


3 引物和dNTP应分装储存,分装时应标明时间,以备发生污染时查找原因。


(

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