·用户注册 · · | 设为首页 | 加入收藏
网站首页 科室简介 专家介绍 文献资料 平台建设 科室图片 资料搜索 联系我们
高效液相色谱HPLC流动相的选择的原则
作者:蛋白质药…    文章来源:www.yaodongxue.cn    点击数:    更新时间:2012-1-7          ★★★【字体:

中国药学人才网 

1.流动相的性质要求 
一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。 
选择流动相时应考虑以下几个方面: 

①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩,从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。 

②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关,特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。 

③必须与检测器匹配。使用UV检测器时,所用流动相在检测波长下应没有吸收,或吸收很小。当使用示差折光检测器时,应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相,以提高灵敏度。 

④粘度要低(应<2cp)。高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质,降低柱效,还会使柱压降增加,使分离时间延长。最好选择沸点在100℃以下的流动相。 

⑤对样品的溶解度要适宜。如果溶解度欠佳,样品会在柱头沉淀,不但影响了纯化分离,且会使柱子恶化。 

⑥样品易于回收。应选用挥发性溶剂。 

2.流动相的pH值 

采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时,通过调节流动相的pH值,以抑制样品组分的解离,增加组分在固定相上的保留,并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸,流动相的pH值越小,组分的k值越大,当pH值远远小于弱酸的pKa值时,弱酸主要以分子形式存在;对弱碱,情况相反。分析弱酸样品时,通常在流动相中加入少量弱酸,常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液;分析弱碱样品时,通常在流动相中加入少量弱碱,常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。 

注:流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用,减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺(如三乙胺)又称为减尾剂或除尾剂。

流动相选择方法
1:由强到弱: 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验,这样可以很快地得到分离结果,然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。 
2: 三倍规则 :每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量,保留因子约增加3倍,此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中,注意观察各个峰的分离情况。 
3: 粗调转微调:当分离达到一定程度,应将有机溶剂10%的改变量调整为5%,并据此规则逐渐降低调整率,直至各组分的分离情况不再改变。 
 
 
 
 
 
 
 
 
++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++
 
 
 
 
本周讨论话题:1、液相色谱流动相的选择条件
              2、HPLC级试剂与其它种类(等级)试剂的区别

小结(主要依据hrcren的回复):
液相色谱流动相的选择条件:
1、样品易溶,且溶解度尽可能大。
2、化学性质稳定,不损坏柱子。
3、不妨碍检测器检测,紫外波长处无吸收。
4、粘度低,流动性好。
5、易于从其中回收样品。
6、无毒或低毒,易于操作。
7、使用HPLC级试剂。
8、废液易处理,不污染环境。
9、在满足实验条件下,价格便宜。

HPLC级试剂与其它种类(等级)试剂的区别
1、一般纯度相对较高,主要要求在紫外波段有很低的吸收以及去除颗粒杂质。
2、杂质少,不干扰样品出峰
3、粘度低,流动性好

下面提供已开展(结束)的讨论链接,大家可点击察看。

每周讨论之一:HPLC的操作条件(环境)--已结束
每周讨论之二:HPLC泵的使用和维护注意事项--进行中
 
最佳答案:
液相色谱流动相的选择条件:
1、样品易溶,且溶解度尽可能大。
2、化学性质稳定,不损坏柱子。
3、不妨碍检测器检测,紫外波长处无吸收。
4、粘度低,流动性好。
5、易于从其中回收样品。
6、无毒或低毒,易于操作。
7、易于制成高纯度,即色谱纯。
8、废液易处理,不污染环境。
9、在满足实验条件下,价格便宜。

HPLC级试剂与其它种类(等级)试剂的区别
1、一般纯度相对较高
2、杂质少,不干扰样品出峰
3、粘度低,流动性好


 

  • 上一篇文章:

  • 下一篇文章:
  • 蛋白多肽类药物临床前药动学实验室 YaoDongXue.Cn 网站备案编号:苏ICP备11051587号
     中国药科大学江宁校区(南京龙眠大道639号)