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高效液相色谱知识收藏(转载)1 Agilent1100
作者:蛋白质药…    文章来源:www.yaodongxue.cn    点击数:    更新时间:2012-1-7          ★★★【字体:

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(一)、开机:

    1、打开计算机,进入Windows NT (或Windows 2000)画面,并运行Bootp Server程序。

     2、打开 1100 LC 各模块电源。

     3、待各模块自检完成后,双击Instrument 1 Online图标,化学工作站自动与1100LC通讯,进入的工作站画面。

    4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”,“Show status toolbar”,“System diagram”,”Sampling diagram”,使其命令前有“√”标志,来调用所需的界面。

   5、把流动相放入溶剂瓶中。

   6、打开Purge阀。

   7、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入泵编辑画面。

   8 、设Flow:5ml/min,单击OK。

   9、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Pump control选项,选中On,单击OK,则系统开始Purge,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续Purge,直到所有要用通道无气泡为止。

   10、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Pump Control选项,选中Off,单击Ok关泵, 关闭Purge  valve。

   11、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入Pump编辑画面,设Flow:1.0ml/min。

   12、单击泵下面的瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击Ok。

 

(二)数据采集方法编辑:

    1、开始编辑完整方法:

     ●从“Method”菜单中选择“Edit entire method” 项,如上图所示选中除“Data analysis ”外的三项,单击Ok,进入下一画面。

    2、方法信息:

     ●在“Method Comments”中加入方法的信息(如:方法的用途等)。

     ●单击Ok 进入下一画面。

    3、泵参数设定:(以二元泵为例)

      ●在“Flow”处输入流量,如1ml/min,在“Solvent B”处输入70.0,(A=100-B) ,也可Insert 一行”Timetable” ,编辑梯度。在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。

     ●  单击Ok进入下一画面。

    4、自动进样器参数设定:

     ●选择合适的进样方式, 进样体积 1.0ul ,洗瓶位置为6号。“Standard Injection”----只能输入进样体积,此方式无洗针功能。“Injection with Needle Wash”----可以输入进样体积和洗瓶位置,此方式针从样品瓶抽完样品后,会在洗瓶中洗针。“Use injector program”---可以点击Edit 键进行进样程序编辑。

     ●点击Ok进入下一画面。

    5、柱温箱参数设定:

      ●在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”more>>” 键,如图所示,选中”Same as left”---使柱温箱的温度左右一致。

       ●点击ok进入下一画面。

     6、VWD检测器参数设定:

       ●在”Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,  在”Peak width (Response time)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min  (2s)。

       ●在Timetable 中可以“Insert”一行,输入随时间切换的波长,如1min  ,波长=300nm。点击ok进入下一画面。

     7、DAD检测器参数设定:

       ●检测波长: 254nm,BW=30nm,     参比波长=350nm,BW=100nm; 

       ●检测波长:一般选择最大吸收处的波长。样品带宽BW: 一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长:一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽BW:至少要与样品信号的带宽相等,许多情况下用100nm作为缺省值。Peak width(Response time):其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。Slit—狭缝窄,光谱分辨率高;宽时,噪音低。同时可以输入采集光谱方式,步长,范围,阈值。选中所用的灯。

       ●点击Ok进入下一画面。

     8、RID检测器参数设定:

       ●色谱条件:  

         进样体积: 20ul 。      光学单元温度:  Off 。

         极性: 正。           峰宽(响应时间) :  4s  。

       ●“Optical Unit Temperature”---若环境温度控制在±2℃,设定为Off,  若环境温度不稳定,则设定光学单元温度为高于环境温度5度,以防样品在池中沉淀。“Peak width”---大多数分析设为4S,只有在高速分析下设为更短。“Automatic recycling after analysis”---在不进行分析时可以让流动相循环,节省流动相,检测器连续运行,可随时投入使用。

       ●点击RID图标,选择RID  Control :Heater 设为On,若要循环流动相,必须将“Recycling Valve”设为ON。手动purge 参比池,将其设为On,并输入Purge 时间。 

      9、FLD检测器参数设定:

        色谱条件: 

        ●   样品:P/N 01018-68704  用甲醇稀释为1:10。

        ●    进样体积:5ul。

        ●    柱温箱:  30℃ 。   EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10。

        ●    响应时间=4s.     停止时间: 出峰完毕。

        ●    Excitation A: 激发波长:200-700nm,步长为1nm,或Zero Order。

        ●    Emission:  发射波长: 280-900nm, 步长为1nm,或Zero Order。

        ●    PMT: 大多数应用适当的设定值为10,若高浓度样品峰被切平头,则减少 PMT 值。

        ●  “Peak width”:大多数应用设为4s,只有快速分析采用小的设定值。

        ●    Multi Ex : 多波长及光谱(激发)。

        ●    Multi Em:多波长及光谱(发射)。

        ●    同时可以输入范围Range、步长step、采集光谱。

      10、在“ Run time checklist ”中选中“Data acquisition”,单击Ok。

      11、单击“Method”菜单,选中“Save method as”,输入一方法名,如“test”,单击Ok。

      12、从菜单 “View”中选中”Online signal” ,选中Windows 1,然后单击Change 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击Ok.(如同时检测二个信号,则重复12,选中Windows 2)。

      13、从“Run  control ”菜单中选择“Sample info”选项,如上图所示,输入操作者名称,在“Data file ”中选择“Manual”或“Prefix”。

      区别: Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖。Prefix—在Prefix 框中输入前缀,在Counter 框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名,如vwd0001,vwd0002……。

     14、从Instrument 菜单选择System on。

     15、等仪器Ready,基线平稳,从Method菜单中选择“Run method”,进样。

 

(三)、数据分析方法编辑:

    1、从“View”菜单中,单击“Data analysis”进入数据分析画面。

    2、从“File”菜单选择“Load signal”,选中您的数据文件名,如下图所示。单击Ok。

    3、做谱图优化,从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项,。从Ranges中选择Auto scale及合适的显示时间,单击ok,或选择”Use Ranges” 调整。反复进行,直到图的比例合适为止。

    4、积分:

      (1)、从“Integration”中选择 “Auto integrate”,如积分结果不理想,再从菜单中选择“Integration  Events”选项,选择合适的Slope sensitivity,Peak width,Area reject,Height reject。

      (2)、从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项, 则数据被积分。

      (3)、如积分结果不理想,则修改相应的积分参数,直到满意为止。

      (4)、单击左边“√”图标,将积分参数存入方法。

    5、打印报告:

      (1)、从“Report”菜单中选择“Specify report”选项,进入如上画面。

      (2)、单击“Quantitative  Results”框中Calculate右侧的黑三角,选中Percent(面积百分比),其它选项不变。

      (3)、单击Ok.

      (4)、从“Report”菜单中选择“Print report”,则报告结果将打印到屏幕上,如想输出到打印机上,则单击Report 底部的“Print”钮。

 

(四)、关机:

      ●  关机前,用 100%的水冲洗系统20分钟,然后用有机溶剂冲洗系统10分钟(如ACN),然后关泵,(适于反相色谱柱)。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]

      ●  退出化学工作站,及其它窗口,关闭计算机(用shut down关)。

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